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基因沉默干扰
基因沉默干扰

基因沉默细胞的建立

 

    RNA干扰技术理论上可以在任何动物模型上进行。通过制各针对靶基因mRNA不同区段的siRNA转基因动物,有可能获得对靶基因不同程度的沉默效果,从而可以模拟数量遗传性状。这一优点是基因敲除技术所不具备的。此外,这种技术不需要复杂的过程,能够在数周内花费只有基因敲除动物的很少一部分就可以对基因功能进行研究。

RNA干扰基因敲除动物模型的问题在于siRNA载体导入的成功率较低,所涉及的dsRNA不能有效地沉默靶基因的转录。此外,有研究表明导入大量shRNA会影响内源性miRNA的水平和活性。

 

技术原理

dsRNApre-miRNA被导入细胞后,能够被一种特异的核酸内切酶(Dicer)识别并切割成为小片段,这些片段在RNA解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-Induced Silencing ComplexRISC),RISCmRNA同源区进行特异性结合,若miRNAmRNA的结合位点完全配对,则切割mRNA;若miRNAmRNA的结合位点不完全配对,则抑制mRNA的翻译。

 

应用领域

1. 基因功能研究,活体生物上进行基因功能研究与验证;

2. 基因治疗,精确定位,靶向治疗;

3. 构建动物模型;

4. 改造和培育新品种。

 

服务流程

1.   细胞分型;

2.   细胞预实验;

3.   针对沉默基因设计合适靶点;

4.   构建慢病毒;

5.   shRNAmiRNA功能验证实验;

6.   慢病毒包装;

7.   基因沉默细胞系的建立;

8.   细胞基因沉默检测。

 

客户提供

1. 目的基因序列;

2. 其他个性化定制要求,譬如启动子、荧光标记基团、Tag标签等选择要求。

 

交付内容

{C}1.{C}构建完好的带有目的基因的载体;

{C}2.{C}病毒滴度测定的荧光显微照片和流式细胞数据;

{C}3.{C}基因沉默效果验证结果。

 

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